ШНАЙДЕР Александр Александрович РАЗРАБОТКА НОВЫХ МЕТОДОВ ПРИМЕНЕНИЯ АКАРИЦИДОВ ПРИ ВАРРОАТОЗЕ ПЧЕЛ И ИХ ЭФФЕКТИВНОСТЬ НА ПАСЕКАХ ТЮМЕНСКОЙ ОБЛАСТИ

Save this PDF as:
 WORD  PNG  TXT  JPG

Размер: px
Начинать показ со страницы:

Download "ШНАЙДЕР Александр Александрович РАЗРАБОТКА НОВЫХ МЕТОДОВ ПРИМЕНЕНИЯ АКАРИЦИДОВ ПРИ ВАРРОАТОЗЕ ПЧЕЛ И ИХ ЭФФЕКТИВНОСТЬ НА ПАСЕКАХ ТЮМЕНСКОЙ ОБЛАСТИ"

Транскрипт

1 На правах рукописи ШНАЙДЕР Александр Александрович РАЗРАБОТКА НОВЫХ МЕТОДОВ ПРИМЕНЕНИЯ АКАРИЦИДОВ ПРИ ВАРРОАТОЗЕ ПЧЕЛ И ИХ ЭФФЕКТИВНОСТЬ НА ПАСЕКАХ ТЮМЕНСКОЙ ОБЛАСТИ Специальность паразитология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук 1 3 ШОй 2009 Тюмень 2009

2 Работа выполнена в лаборатории по изучению болезней пчел ГНУ «Всероссийский научно исследовательский институт ветеринарной энтомологии и арахнологии» Сибирского отделения Россельхозакадемии. Научный руководитель: кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Домацкая Тамара Федоровна (ГНУ ВНИИВЭА) Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Кузьмина Эмма Викторовна (ФГОУ ВПО ТГСХА) кандидат ветеринарных наук Кононов Василий Прокопьевич (ГУ Городская станция по борьбе с болезнями животных, г. Тюмень) Ведущая организация: ФГОУ ВПО Институт ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета Защита диссертации состоится июня в 10 часов на заседании диссертационного совета ДМ при ГНУ «Всероссийский научноисследовательский институт ветеринарной энтомологии и арахнологии» по адресу: , г. Тюмень, ул. Институтская, 2, тел. (3452) , С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ «Всероссийский научно исследовательский институт ветеринарной энтомологии и арахнологии» и на сайте в разделе авторефераты. Автореферат разослан мая 2009 года. Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук В.Ю. Неверов

3 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В настоящее время наиболее эффективны химические методы борьбы с варроатозом, включающие использование акарицидных препаратов системного и контактного действия из различных химических групп (Williams, 2000, цит. по Радуль, Плотников, Татарчук, 2004). К ним относятся пиретроиды (флувалинат, флуметрин, акринатрин), формамины (амитраз), бензилаты (бромпропилат), фосфорорганические соединения (кумафос), фенолы (тимол), органические кислоты, эфирные масла (Игнатьева и др., 2004). В России наиболее широкое применение имеют препараты на основе флувалината и амитраза (Батуев и др., 2001). Однако применение химических акарицидов обнажает ряд проблем. Это загрязнение продукции пчеловодства их остатками и метаболитами (Арцоне, 1984; Кривцова, 2002; Гробов, Лихотин, 2003; Сохликов, Игнатьева, 2005; Bolganov, Imdorf, Kilchenmann, 1990; Pechhacker, 2002), токсическое и побочное действие препаратов на пчел (Гробов и др., 1985а; Смирнов, Шатрова, 1992; Игнатьева и др., 2004; Шишканов, 2007; Gromisz, 1988; Z. Gromisz, M. Gromisz, 1988; Jedruszuk, 1989; Getchev, Kantchev, 1998; Moosbeckhofer, 2000; Kasprzak, Hartwig 2005), появление устойчивости возбудителя к акарицидам (Замазий, 1989, 1991; Киселев, 1996, 1998; Кривцов, Лебедев, 1999; Батуев и др., 2001; Игнатьева и др., 2004; Eischcn, 1997; Gufler, 1997; Berg и др., 1999; Shahrouzi, 1999; Mathieu, Faucon, 2001; Faucon, Drajnudel, Aurieres, 2001; Munn, 2003; Martin Stephen, 2004; Rodnguez Dehaibes Sostenes и др., 2005). На эффективность препаратов большое влияние оказывает физиологическое состояние пчелиных семей, погодные и природноклиматические условия (Гробов и др., 1991; Иванов, 2005; Сохликов, Игнатьева, 2006). Вместе с тем мало данных об эффективности акарицидов, применяемых для лечения пчел, в различных природно климатических зонах Российской Федерации. В связи с этим необходимо периодическое изучение эффективности рекомендованных средств и дальнейшее усовершенствование препаратов и методов их применения, прежде всего на региональном уровне. Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является изыскание эффективных экономически обоснованных средств и методов терапии пчелиных семей при варроатозе. Для выполнения указанной цели нами были поставлены следующие задачи: 1. Определить эффективность ранее рекомендованных химических препаратов в условиях Тюменской области; 2. Провести поиск новых высокоэффективных методов применения химических препаратов для лечения пчел при варроатозе, обеспечивающих получение продукции высокого санитарного качества; 3

4 3. Дать экономическое обоснование применения новых методов терапии пчелиных семей при варроатозе. Научная новизна. Впервые в условиях Тюменской области при варроатозе пчел определена акарицидная эффективность амипола Т, варропола, акарасана, фумисана и щавелевой кислоты, применяемой шведским методом. Разработаны и испытаны новые препаративные формы флувалината, которые показали высокую акарицидную эффективность при варроатозе. На один из них получен патент на изобретение «Способ борьбы с варроатозом пчел», дано экономическое обоснование их использования. Впервые при варроатозе в условиях Тюменской области изучена эффективность щавелевой кислоты, применяемой методом поливания пчел в улочках. Практическая значимость. На основании результатов исследований разработаны проект инструкции по применению акарицидного коврика при варроатозе, проект ТУ на акарицидный коврик. Положения, выносимые на защиту. акарицидная эффективность при варроатозе ранее рекомендованных химических препаратов в условиях Тюменской области; терапевтическая эффективность акарицидных холстиков, акарицидных ковриков и щавелевой кислоты; экономическое обоснование применения акарицидных ковриков и щавелевой кислоты в борьбе с варроатозом. Апробация работы. Материалы диссертации доложены: на Ученых советах ГНУ ВНИИВЭА ( гг.) и межлабораторном совещании (2009 г.); на международной конференции «Пчеловодство XXI век. Темная пчела (Apis mellifera) в России» (Москва, мая 2008 г.); на Межрегиональном совещании энтомологов Сибири и Дальнего Востока (в рамках Сибирской зоологической конференции) (Новосибирск, сентября 2008 г.); на конференции «14 е Ершовские чтения, посвященные 60 летию образования Тюменской области и 50 летию Ишимского государственного педагогического института им. П.Е. Ершова» (Ишим, ИГПИ, 2004 г.). Публикация результатов исследований. По материалам исследований опубликовано 4 статьи, в том числе 1 в издании, рекомендованном ВАК. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и список литературы, который включает 247 источников, в том числе 85 на иностранных языках. Текст иллюстрирован 32 таблицами и 4 рисунками. 4

5 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материал и методы исследований Настоящие исследования выполнены в период с 2004 по 2008 год в лаборатории по изучению болезней пчел ГНУ «ВНИИ ветеринарной энтомологии и арахнологии» и на пасеках Тюменской области. В диссертации использованы данные по диагностической и экспериментальной работе, проведенной лично автором, а также совместно с сотрудниками ГНУ «ВНИИВЭА» и Тюменской областной ветеринарной лаборатории. Распространение варроатоза пчел на пасеках Тюменской области представлена на основе анализа результатов диагностических исследований на варроатоз за 16 лет (с 1993 по 2008 гг.), предоставленных Тюменской областной ветеринарной лабораторией, и их статистической обработки. С целью определения эффективности ранее рекомендованных средств при варроатозе пчел на пасеках Тюменской области нами проведено 9 пасечных опытов, в которых была задействовано 70 пчелиных семей местной популяции (помесные пчелы), на стационарных пасеках, расположенных в Тюменском, Исетском и Нижнетавдинском районах. Исследования проводили как на безрасплодных пчелиных семьях, так и на семьях с расплодом в леший и осенний периоды. В опытах испытаны 9 препаратов на основе флувалината, амитраза и бромпропилата, а также щавелевая кислота. Изучены разные препаративные формы акарицидов пластины длительного действия (апистан, фумисан, амипол Т, варропол), тлеющие аэрозолеобразующие (термические) препараты (ТЭДА, танис, акарасан), растворы (эмульсии), применяемые методом поливания пчел в межрамочном пространстве (бипин, бивар, щавелевая кислота). С целью поиска новых способов применения акарицидов проведены лабораторные и пасечные опыты. Исследования акарицидной активности химических препаратов и их токсичности в лабораторных условиях проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по изучению препаратов и способов борьбы с варроозом пчел» (Гробов и др., 1981). Для проведения лабораторных опытов использовали садки из металлической сетки, в которые рассаживали по 50 пчел с клещами. Всего было проведено два опыта, в которых использовано 2400 пчел. Изучали новую препаративную форму акарицидные холстики, содержащие флувалинат. Полученные данные подвергали статистической обработке. С целью определения эффективной дозы разрабатываемых препаратов, оптимального срока и длительности обработки пчел, изучения содержания остатков действующего вещества в меде и влияния обработок на физиологическое состояние и продуктивность пчелиных семей проведено 11 пасечных опытов. В них была задействована 141 пчелиная семья местной популяции (помесные пчелы) на стационарных пасеках Исетского, Нижнетавдинского, 5

6 Тюменского и Ялуторовского районов Тюменской области. Производственный опыт проведен на 45 пчелиных семьях. Для изготовления препаратов в лабораторных и пасечных исследованиях использовали флувалинат технический ТУ Изучение акарицидных холстиков, содержащих амитраз, проводили в двух пасечных опытах на 18 пчелиных семьях. Для испытания модифицированного метода применения щавелевой кислоты проведено три пасечных опыта на 19 пчелиных семьях. В исследованиях использовали щавелевую кислоту по ГОСТ Пасечные опыты проводили, руководствуясь «Методическими рекомендациями по изучению препаратов и способов борьбы с варроатозом пчел» (Гробов и др., 1981). Пчел содержали в 16 рамочных ульях. Определение заклещеванности пчел в безрасплодных семьях проводили по пробам пчел в количестве особей, отобранных из центра гнезда в специально свернутый лист бумаги, в семьях с расплодом по пробам пчел и пробам запечатанного расплода, содержащим не менее 100 куколок. Материал до момента исследования хранили в морозильном отделении холодильника. При обработках пчелиных семей методом полива в межрамочные пространства использовали шприц дозатор. Наличие и количество клещей на пчелах определяли в лаборатории индивидуально или групповым методом. При индивидуальном обследовании осматривали всех насекомых в пробе. Групповое исследование пчел на варроатоз проводили с использованием прибора ПДИЭА 1 (Столбов, Васьков, 1976). При обследовании расплода ячейки вскрывали скальпелем и осматривали каждую ячейку с куколкой; учитывали только имаго самок клеща V. destructor. При обнаружении паразитов заклещеванность пчел или куколок выражали индексом обилия (ИО), который рассчитывали по количеству клещей на единицу учега (Беклемишев, 1961), т.е. в нашем случае на одну обследованную пчелу или куколку. Полученные материалы подвергали биометрической обработке по методам, изложенным Е.К. Меркурьевой (1970), при использовании комплекта программ Excel. Расчет терапевтической эффективности обработок проводили по формуле Аббота в модификации И.В. Селина (1973). Определение содержания остатков флувалината в меде после обработок акарицидными холстиками и акарицидными ковриками проводили совместно со старшим научным сотрудником лаборатории энтомологии и дезинсекции ГНУ ВНИИВЭА О.В. Кукса в соответствии с «Методическими указаниями по определению флувалината в меде и воске методом газожидкостной хроматографии», утвержденными МЗ СССР 29 июля 1991 года за Расчет экономической эффективности применения акарицидных ковриков проводили с использованием методики «Определение ущерба от болезней пчел и экономической эффективности проводимых мероприятий» 6

7 (Воскобойник и др., 1991). Затраты труда определяли в соответствии с нормативами времени обслуживания в пчеловодстве (Буренин, Котова, 1985). Распространение варроагоза пчел на пасеках Тюменской области Как показал анализ ветеринарной отчетности Тюменской областной ветеринарной лаборатории за период с 1993 по 2008 годы, ежегодно в области исследуют на варроатоз проб пчел с пасек Юга Тюменской области. В последние 5 лет исследуют на варроатоз проб пчел. При количестве пчелиных семей в области, по данным Всероссийской сельскохозяйственной переписи (на 1 июля 2006 г.), 216,3 тыс., это составляет 0,35 0,57%. Неблагополучие по данному заболеванию выявляют в разные годы на 39,6 86,3% (в среднем на 61,5±3,3%) обследуемых пасек, а из исследованных проб положительными являются 19,2 62,3% (в среднем 39,2±2,6%). В последние годы отмечается увеличение количества диагностических исследований: в период с 2001 по 2008 гг. количество обследуемых пасек возросло в 1,9, а число исследованных проб в 1,4 раза по сравнению с г. При этом из обследуемых пасек процент неблагополучных снизился с 70,4 до 52,7, процент положительных проб снизился с 43,4 до 34,9. За годы по данным отчетности Тюменской областной вегеринарной лаборатории исследованы пробы пчел из всех районов Юга Тюменской области, кроме Уватского, очень мало исследовано проб из Бердюжского и Сорокинского районов. Клещ Варроа обнаружен во всех районах. В гг. наиболее благополучными по варроатозу являются Абатский, Аромашевский и Юргинский районы (положительны менее 10% проб), неблагополучными Голышмановский, Упоровский и Ярковский (положительны более 60% проб). Определение эффективности ранее рекомендованных средств при варроатозе пчел на пасеках Тюменской области Изучение эффективности апистана, фумисана, амипола Т н варропола Апистан и фумисан пластины длительного действия, содержащие в качестве действующего вещества 800 и 80 мг флувалината соответственно. Применяют их, размещая пластины препарата в гнезде между сотами. Изучение эффективности апистана проводили в двух опытах. Первый опыт проводили в летний период на пчелиных семьях с расплодом с 14 июня по 27 июля. Опытным семьям в середину гнезда помещали по одной пластине препарата. Второй опыт проводили осенью на пчелиных семьях без расплода. Опытных пчел обработали апистаном согласно инструкции, используя по две пластины на семью пчел. В контроле пчел не лечили. 7

8 Как показали результаты обработки, эффективность апистана в обоих опытах составила 100%. Испытание фумисана проводили в сентябре. При закладке опыта во всех семьях пчел имелся расплод, поэтому обработку проводили в течение двух недель. В опытной группе в три пчелиные семьи помещали по 2 пластины препарата в соответствии с инструкцией по применению фумисана. Контрольных пчел не лечили. Как показали результаты опыта, эффективность обработки пчелиных семей фумисаном составила 100%. Амипол Т и варропол препараты длительного действия, содержащие в качестве действующего вещества амитраз. Для определения эффективности амипола Т и варропола провели опыт на семьях пчел с расплодом. Для этого в августе после изъятия из ульев товарного меда подобрали 9 пчелиных семей, которые поделили на три равные группы. Все семьи занимали по 16 улочек и имели в среднем по 5 рамок разновозрастного расплода. Пчелиные семьи первой опытной группы обработали амиполом Т, второй варрополом в соответствии с инструкциями по их применению, размещая в гнезде пчел по две пластины препарата на 30 дней. В контроле пчел не обрабатывали. Как показали результаты опыта, применение амипола Т снижало с учетом контроля зараженность пчел на 97,7±2,3%, варропола на 94,9±2,6%. Результаты опытов представлены в таблице 1. Таблица 1 Эффективность при варроатозе препаратов длительного действия Наименование препарата Апистан Апистан Фумисан Амипол Т Варропол Срок обработки Длительность обработки, дней Наличие расплода при обработке Эффективность с учетом контроля, % ,7±2,3 94,9±2,6 Таким образом, в условиях Тюменской области препараты длительного действия на основе флувалината апистан и фумисан показали высокую акарицидную эффективность на уровне 100%. Учитывая, что содержание действующего вещества в отечественном препарате фумисан в 10 раз ниже, чем в импортном апистане, а рекомендованный срок обработки при наличии расплода в два раза короче (21 25 суток против 42 для апистана), фумисан является более безопасным с точки зрения загрязнения продукции пчеловодства остатками действующего вещества. При этом фумисан значительно дешевле апистана. Препараты длительного действия, содержащие в качестве дейст 8

9 вующего вещества амитраз, по эффективности уступали таковым на основе флувалината. Изучение эффективности бипина н бнвара С целью определения терапевтической эффективности бипина и бивара провели опыт на безрасплодных семьях в осенний период. Для этого подобрали 10 пчелиных семей, которые поделили на 3 группы. Первую группу (3 пчелиные семьи) лечили двукратно бипином с интервалом 24 часа, вторую (4 семьи) биваром в аналогичном порядке. Перед применением концентраты эмульсин смешивали с водой и обрабатывали пчел методом поливания в межрамочные пространства из расчета 10 мл на улочку. Пчел контрольной группы (3 семьи) не лечили. Как показали результаты исследований, двукратные обработки пчелиных семей указанными препаратами снижали численность эктопаразитов с учетом контроля на 91,3±0,7% (бипин) и 95,5±2,9% (бивар). Определение терапевтической эффективности термических препаратов танис, ТЭДА и акарасан С целью определения эффективности препаратов танис, ТЭДА и акарасан провели 3 опыта на безрасплодных семьях в осенний период. Обработки препаратами проводили в соответствии с инструкциями по их применению при температуре не ниже 10 С. В первом опыте 3 пчелиные семьи подвергли обработке танисом двукратно с интервалом 24 часа из расчета 1 пластина на семью. Тлеющие пластины вводили в нижние летки ульев, которые закрывали на 20 минут. Контрольную группу пчел (3 семьи) не лечили. Обработки пчелиных семей танисом снижали численность эктопаразитов с учетом контроля на 98,2±1,8 %. Для второго опыта подобрали 13 пчелиных семей, которые поделили на две группы. Первую группу (5 пчелиных семей) обработали двукратно с интервалом 24 часа препаратом ТЭДА в соответствии с наставлением по его применению, вторую (контрольную) группу (8 семей) препаратом танис вышеописанным методом. Как показали результаты опыта, эффективность обоих препаратов составила 100%. Для изучения эффективности акарасана подобрали 7 пчелиных семей, которые поделили на две группы опытную (4 семьи) и контрольную (3 семьи). Опытные семьи обработали двукратно с интервалом 24 часа акарасаном из расчета одна пластина на семью, для чего тлеющую пластину вводили в леток, который закрывали на 20 минут. Контрольные семьи не обрабатывали. До обработки и через 3 дня после нее из семей отобрали пробы пчел и исследовали их на наличие клещей. Как показали результаты опыта, акарасан при двукратной с интервалом 24 часа обработке снижал численность клещей V. destructor в пчелиных семьях с учетом контроля на 96,7±1,9 %. 9

10 Таким образом, в условиях Тюменской области термические аэрозолеобразующие препараты, содержащие в качестве действующего вещества флувалинат, амитраз и бромпропилат, показали при двукратной обработке безрасилодных семей в осенний период высокую эффективность на уровне 96,7 100%. Изучение эффективности при варроатозе щавелевой кислоты, применяемой «шведским методом» Опыт проводили в октябре 2007 г на безрасплодных пчелиных семьях по методу, описанному G. Topolska (2004). Для проведения опыта подобрали 6 пчелиных семей, которые разбили на две равные группы опытную и контрольную. Рабочий раствор готовили, смешивая 100 г сахара, 100 мл воды и 7,5 г щавелевой кислоты (ГОСТ ) до полного растворения. Пчелиные семьи опытной группы обработали однократно полученным раствором методом поливания пчел в межрамочных пространствах из расчета 5 мл на улочку. Контрольных пчел обработали сахарно водным раствором без препарата аналогичным образом. До обработки и через 4 дня после нее из семей отобрали пробы пчел и исследовали их на наличие клещей. Как показапи результаты исследований, акарицидная эффективность однократной обработки щавелевой кислотой составила с учетом контроля 85,2±3,9 %. Гибели пчел и маток после обработки не отмечали. В процессе обработки отмечено, что рабочий раствор является слишком вязким, что затрудняет его применение. Таким образом, проведенные исследования показали, что испытанные нами препараты на пасеках Тюменской области являются высокоэффективными акарицидами. Амитраз наибольшую эффективность (до 100 %) показал в виде дымового аэрозоля (препарат ТЭДА), при использовании его методом полива (препарат бипин) получена значительно меньшая эффективность (91,3±0,7, разница достоверна). Флувалинат был высокоэффективен (98,2 100%) в разных препаративных формах как пластинах длительного действия, так и термического аэрозоля. Поиск новых способов применения акарицидов Как показал анализ литературы, препараты длительного действия представляют собой пластины из древесины или искусственных материалов, пропитанные акарицидным средством. Указанные препараты применяют, размещая их между сотами в гнезде пчел. При этом препарат контактирует с сотами, что способствует их загрязнению действующим веществом. В связи с этим нами поставлена задача разработать новый препарат длительного действия, применение которого исключает контакт препарата с сотами. Для 10

11 решения этой задачи нами предложены новые препаративные формы акарицидный холстик и акарицидный коврик. Акарицидпым холстиком нами названа препаративная форма, представляющая собой содержащий действующее вещество отрезок ткани, который помещают с целью обработки пчелиной семьи на верхние бруски рамок под основной холстик. При этом он контактирует с рамками, но не контактирует с сотами. Располагаясь над большинством улочек, акарицид присутствует во всех покрытых препаратом улочках. Акарицидный коврик препаративная форма, представляющая собой пропитанный акарицидным веществом лист картона или другого материала, который с целью обработки помещают на дно улья возле летка. При этом препарат не контактирует с рамками. В то же время размещение препарата перед летком обеспечивает регулярный контакт с ним пчел и трутней. Возможность использования предполагаемых препаративных форм изучена нами в лабораторных условиях на примере холстиков с флувалинатом. В пасечных опытах изучена эффективность применения акарицидных холстиков и ковриков, содержащих в качестве действующего вещества флувалинат и амитраз. Изучение акарицидной активности акарицидных холстиков в лабораторных условиях Для проведения лабораторных опытов из льняной ткани вырезали фрагменты (холстики) размером 10x10 см, на которые наносили ацетоновые растворы флувалината из расчета 1,0, 0,5 и 0,25 мг действующего вещества на холстик. После испарения ацетона холстики размещали внутри металлических садков, прикрепляя к одной из сторон. В подготовленные таким образом садки рассаживали по 50 пчел с клещами. Первый опыт проведен в трех повторностях. В каждую повторность брали по 12 садков с пчелами, которые делили на 4 равные группы (3 опытные и 1 контрольную). В первой опытной группе холстики содержали но 1,0, во второй 0,5, третьей 0,25 мг флувалината. В контрольной группе применяли холстики без препарата. Садки помещали в термостат с температурой 28 С и относительной влажностью 75%. Через 24 часа учитывали гибель пчел и клещей для расчета эффективности. Как показали результаты исследований, гибель клещей во всех опытных группах составила от 87,1±3,94 до 96,1 ±1,24 %. Анализ данных по каждому опыту не выявил достоверной зависимости между дозой ДВ и гибелью клещей. Смертность пчел в опытных и контрольных группах была незначительной (в среднем от 1,33 до 2,44 %). Аналогично описанному провели второй опыт, в котором применяли холстики, содержащие 100, 50 и 25 мг флувалината. Как показали результаты опыта, увеличение дозы действующего вещества не вызывало повышения акарицидного эффекта. В то же время гибель пчел в опыте не имела досто 11

12 верных отличий от контроля, что характеризует флувалинат как безопасный для пчел акарицид. Результаты опытов представлены в таблице 2. Таблица 2 Акарицидная эффективность акарицидных холстиков в лабораторных условиях Доза флувалината на садок, мг 1,0 0,5 0, клещей 96,1±1,24 87,1±3,94 89,9±3,85 0,74±0,74 89,6±0,50 86,8±3,09 92,8±2,67 1,6*1,6 Погибло через 24 часа, % пчел 1,33±0,58 2,44±1,37 1,33±0,58 1,33±0,67 4,7±1,8 4,7±2,9 3,3±1,8 4,0±2,0 Полученные результаты позволили нам продолжить исследования в этом направлении в условиях пасек на пчелиных семьях. Эффективность применении акарицидных холстиков на семьях пчел Целью проведения исследований являлось определение эффективной дозы препарата, оптимального срока и длительности обработки пчел, а также изучение содержания остатков действующего вещества в меде и влияния обработок на физиологическое состояние и продуктивность пчелиных семей. Изучение эффективности различных доз действующего вещества, срока и длительности обработки и накопления остатков препарата в меде проводили в четырех опытах. Обработки проводили, размещая хблстик в ульи на зерхние бруски рамок под основным холстиком, затем укрывали утеплительным материалом. В контроле использовали холстики без действующего вещества. До обработок и после них из пчелиных семей опытных и контрольных групп отбирали пробы пчел и расплода для определения их зараженности клещами. В первом опыте изучали на семьях с расплодом акарицидную эффективность холстиков, содержащих 75 и 300 мг флувалината. Для этого подобрали две опытных (по 5 пчелиных семей) и одну контрольную (4 пчелиных семьи) группы. Перед обработкой готовили из льняной ткани холстики размером 30x40 см, которые пропитывали действующим веществом в вышеуказанных количествах. Первую опытную группу обработали холстиками, со 12

13 держащими 300 мг, вторую 75 мг флувалината. За семьями всех групп вели наблюдения в течение 16 дней. Как показали наши наблюдения, в первой опытной группе, обработанной холстиками с 300 мг флувалината, заклещеванность пчел снизилась на 56,1±12,5%. Во второй группе отмечали рост численности эктопаразитов. В контрольной группе зараженность пчелиных семей клещами V. destructor за период опыта возросла в среднем на 11%. Для проведения второго опыта готовили холстики указанного размера, которые пропитывали флувалинатом в количестве 1400 мг. Исследования проводили в июне июле на пчелиных семьях с расплодом. С этой целью подобрали 4 опытные и 3 контрольные пчелиные семьи. В опытные семьи на 30 дней поместили холстики с препаратом. Учет результатов опыта показал, что зараженность клещами V. destructor пчел в семьях опытной группы в результате обработки снизилась в среднем на 77,0±9,4%, при этом в двух из четырех опытных семьях эффективность обработки достигла 100% В третьем опыте изучали противоклещевую активность акарицидных холстиков в осенний период. Для проведения опыта изготовили акарицидные холстики указанного размера, которые пропитывали действующим веществом в количестве 120 и 1200 мг. В сентябре подобрали 9 пчелиных семей без расплода, которые поделили на три равные группы (две опытные и контрольную). В первой опытной группе пчел в течение 35 суток обрабатывали холстиками, содержащими 120 мг, во второй холстиками с 1200 мг флувалината. Анализ полученных результатов показал, что эффективность обработки безрасплодных пчелиных семей акарицидными холстиками, содержащими 120 и 1200 мг флувалината, составила с учетом контроля 72,6±2,2 и 89,0±5,6% соответственно. Для проведения четвертого опыта сформировали три группы по 5 пчелиных семей в каждой. В гнезда пчелиных семей опытных групп на срок с 11 июня по 20 июля помещали холстики размером 50x60 см, содержащие по 300 мг (1 группа) и 1500 мг (2 группа) флувалината. Контрольную группу обрабатывали апистаном из расчета 2 пластины на семью (1600 мг флувалината). Наблюдения за семьями всех групп проводили в течение 40 дней. По истечении указанного периода из всех семей отобрали пробы пчел, расплода, печатного и открытого меда. Мед исследовали на наличие остатков действующего вещества методом газожидкостной хроматографии. В результате анализа полученных данных было установлено, что эффективность обработок пчелиных семей холстиками, содержащими 1500 мг действующего вещества, и апистаном составляла 100%. Исследования проб меда показали отсутствие остатков действующего вещества. Результаты опытов представлены в таблице 3. 13

14 Таблица 3 Эффективность обработки пчелиных семей акарицидными холстиками Доза флувалината на ность обраплода при учетом контроля, Длитель Наличие рас Эффективность с Срок обработки холстик, мг ботки, дней обработке % ,1±12,5 77,0±9,4 72,6±2,2 89,0±5,6 94,2±5, Таким образом, анализ результатов всех четырех опытов показывает, что наиболее эффективной является обработка пчелиных семей холстиками размером 50x60 см в летний период в течение 40 дней. При этом доза действующего вещества составляет 1500 мг на холстик. Для изучения влияния обработок акарицидными холстиками на развитие пчелиных семей в июне сформировали 20 безрасплодных отводков с плодными матками, которые разделили на две группы опьтгую и контрольную, с учетом силы семей и пораженное клещом V. destructor. До начала опыта все семьи обработали однократно бипином для снижения численности эктопаразитов до относительно безвредного уровня. Затем опытные семьи обработали холстиками, содержащими по 1500 мг флувалината. В гнезда контрольных семей поместили аналогичным образом холстики без препарата. Срок обработки составил 40 дней, после чего холстики из ульев удалили. Учет силы семей вели в июне, июле, августе и октябре. Результаты опыта представлены в таблице 4. Таблица 4 Влияние акарицидных холстиков на развитие пчелиных семей Группа семей Опытная Контрольная До обработки ,3±0,15 4,3±0,17 Сила семьи, рамок ,1±0,55 9,2±0,28 После обработки ,1±0,5 13,3±0, ,7±0,30 7,0±0,29 Кол во расплода после обработки,сотен ячеек ±11 104± ±18 112±18 Как показали результаты исследований, различий в количестве расплода и силе семей между опытной и контрольной группами не выявлено. Та 14

15 ким образом, обработки пчелиных семей акарицидными холстиками не оказали отрицательного влияния на их развитие. Как показали наблюдения, пчелы интенсивно прополисовали размещенные на рамках акарицидные холстики. С одной стороны, это говорит об интенсивном контакте полезных насекомых с препаратом. Но с обратной стороны, запрополисованныи холстик, вероятно, уже не оказывает столь же высокого акарицидного воздействия. Возможно, более медленное прополисование холстиков размером 50x60 см было одной из причин более высокого акарицидного эффекта от применения изучаемого препарата в последнем опыте. Полученные результаты показывают, что акарицидные холстики по эффективности не показали преимуществ по сравнению с другими препаратами длительного действия, а, учитывая содержание действующего вещества, значительно уступают фумисану. Применение холстиков, содержащих мг амитраза, показало их низкую эффективность. Учитывая, что амитраз неустойчив во внешней среде, мы изучили его сохранность в холстиках и выявили, что в течение 60 дней содержание его в холстике падает в 5 раз. Частично этим можно объяснить низкую эффективность препарата. В связи с этим исследования в этом направлении были приостановлены. Изучение эффективности применения акарнцидных ковриков на семьях пчел Акарицидный коврик представляет собой листы картона фильтровального технического размером 250x200x1 мм, пропитанные флувалинатом. С целью обработки пчел препарат вносят на дно улья через нижний леток таким образом, чтобы влетающие и вылетающие пчелы постоянно контактировали с обработанной поверхностью. Терапевтическую эффективность акарицидных ковриков изучали на семьях пчел в шести опытах в летний и летне осенний периоды. Для расчета акарицидной эффективности препарата до обработки и после нее из семей всех групп отбирали пробы пчел, которые исследовали на наличие возбудителя варроатоза. В первом опыте изучали акарицидную эффективность ковриков, содержащих по 200 мг флувалината. Для этого в конце августа подобрали 2 группы (опытная и контрольная) по 3 пчелиных семьи в каждой. В опытные семьи вносили по одному коврику вышеописанным способом на 24 дня. Контрольные семьи не обрабатывали. В начале опыта все семьи имели расплод, к концу опыта расплод в гнездах пчел отсутствовал. В результате проведенных исследований нами установлено, что после обработки численность эктопаразитов снизилась с учетом контроля на 94,3±3,1%. Второй опыт проводили в сентябре на 12 семьях пчел без расплода, из которых сформировали 2 опытные и 2 контрольные группы. В первой опыт 15

16 ной группе пчел обрабатывали в течение 16 дней ковриками, содержащими 160, во второй 100 мг флувалината. Первую контрольную группу обрабатывали фумисаном из расчета 2 пластины на семью в соответствии с инструкцией по применению препарата, вторую группу пчел не лечили. Анализ данных второго опыта показал, что эффективность обработки пчелиных семей акарицидными ковриками со 100 мг флувалината и фумисаном составила 100 %. Инвазированность семей пчел, обработанных ковриками со 160 мг флувалината, снизилась с учетом контроля на 96,8±1,6%. В то же время во второй контрольной группе, где пчел не лечили, численность эктопаразитов возросла в среднем в 1,7 раза. Для проведения третьего опыта подобрали 11 пчелиных семей с расплодом, которые поделили на три группы две опытные (по 4 семьи) и контрольную (3 семьи). До обработки из семей всех групп отобрали пробы пчел и расплода для исследования на наличие клещей, а так же учитывали их силу. Первую опытную группу обработали ковриками, содержащими 200 мг флувалината, вторую аналогичным образом ковриками со 100 мг действующего вещества. В контрольные семьи помещали коврики без препарата. Через 30 дней из всех семей удалили коврики и отобрали пробы пчел и расплода для исследования на наличие клещей. Как показали результаты исследований, эффективность обработки в течение 30 дней пчелиных семей с расплодом ковриками, содержащими 200 мг флувалината, составила с учетом контроля на пчелах 95,4±2,7 %, в расплоде 86,9±7,9 %. Эффективность ковриков со 100 мг флувалината составила 87,6±4,5 и 76,9±1,9 % соответственно. Обработки пчелиных семей акарицидными ковриками не оказали отрицательного влияния на силу семей и количество расплода. В четвертом опыте для изучения эффективности акарицидных ковриков в семьях с расплодом в конце июня подобрали 2 группы пчелиных семей. Опытную группу (4 пчелиных семьи) в июне в течение 30 суток обрабатывали ковриками, содержащими 100 мг действующего вещества. В контрольную группу (3 пчелиных семей) помещали коврики без препарата на аналогичный период. Как показали результаты опыта, обработка пчелиных семей с расплодом в течение 30 дней акарицидными ковриками, содержащими 100 м г флувалината, вызвала гибель эктопаразитов на взрослых пчелах и в расплоде на 93,1±1,9 и 88,0±6,6 % соответственно. Для пятого опыта подобрали 30 пчелиных семей с расплодом, которые поделили на две группы опытную (25 семей) и контрольную (5 семей). Опытные семьи обрабатывали в течение 30 суток акарицидными ковриками, содержащими 100 мг флувалината. В контрольные семьи поместили аналогичным образом коврики без препарата. До обработки и через 30 дней после помещения препарата из 5 семей опытной и 3 семей контрольной группы отобрали пробы пчел и расплода и исследовали их на наличие клещей. Как показали результаты опыта, эффективность обработки в течение 30 дней 16

17 пчелиных семей с расплодом ковриками, содержащими 100 мг флувалината, составила с учетом контроля на пчелах 100 %, в расплоде 94,8±5,2 %. Результаты опытов сведены в таблицу 5. Таблица 5 Эффективности применения акарицидных ковриков на семьях пчел Доза флувлината на коврик, мг Срок обработки Длительность обработки, дней Наличие расплода при обработке Эффективность с учетом контроля, % на пчелах 94,3±3,1 96,8±1, ,4±2,7 87,6±4,5 93,1±1,9 100 в расплоде не изучали 86,9±7,9 76,9*1,9 "88,0±6~6 "~ 94,8±5,2 Шестой (производственный) опыт проводили в летне осенний период на 45 пчелиных семьях. Обработки проводили путем однократного внесения через нижний леток сроком на 35 дней акарицидных ковриков со 100 мг действующего вещества. Эффективность обработки пчелиных семей в производственном опыте составила 98,7±1,2 %. При проведении всех опытов гибели пчел и маток не наблюдали. Как показали наблюдения за обрабатываемыми акрицидными ковриками пчелиными семьями, пчелы в них нетерпимо относились к размещенному в улье препарату. Пытаясь удалить его, пчелы разгрызали коврик по его краям. При этом разные семьи разгрызали акарицидный коврик с различной интенсивностью, что говорит о неравной выраженности их гигиенического поведения. Так как попытки очистить гнездо от постороннего предмета обеспечивали усиленный контакт пчел с препаратом, можно предположить, что в более гигиеничных пчелиных семьях можно ожидать и более высокого акарицидного эффекта от применения акарицидных ковриков. Определение содержания остатков флувалината в меде после обработок акарицидными холст иками и акарицидными ковриками Изучение остатков флувалината в меде после обработок проводили в двух опытах. Как отмечено выше, исследования проб меда после обработки пчелиных семей в летний период (с 11 июня по 20 июля) акарицидными холстиками, содержащими 1500 мг флувалината, в течение 40 дней, показали отсутствие остатков действующего вещества. Для проведения второго опыта 8 августа после отбора товарного меда из ульев подобрали 9 пчелиных семей силой 16 рамок, которые разделили на 17

18 три равные группы. Первую группу пчелиных семей обработали холстиками размером 50x60 см, содержащими 1500 мг флувалината. Во вторую группу поместили акарицидные коврики, содержащие 200 мг действующего вещества. В третью группу вносили акарицидные коврики с 400 мг акарицида. Через 30 суток из всех опытных семей отобрали пробы печатного меда из середины гнезда и исследовали их на наличие остатков действующего вещества. Исследование образцов меда, взятых из пчелиных семей, обработанных акарицидными ковриками, содержащими 200 и 400 мг флувалината, показало отсутствие остатков действующего вещества в продукте. В меде из пчелиных семей, обработанных акарицидными холстиками, флувалинат выявлен в количестве 0,03 0,06 мг/кг. Таким образом, установлена высокая эффективность и безвредность для продукции акарицидных ковриков, содержащих 100 мг флувалината. Применение акарицидных холстиков, в связи с обнаружением остатков действующего вещества в меде, мы считаем нецелесообразным. Изучение эффективности щавелевой кислоты при вярроатозе в различные сезоны года Как показали наши исследования, в условиях Тюменской области эффективной является обработка пчел щавелевой кислотой «шведским методом». С целью усовершенствования этого метода нами был испытан раствор, приготовленный на сахарном сиропе с содержанием сахара 20%, что позволило значительно облегчить обработки. Для изучения эффективности щавелевой кислоты проведено 3 опыта в мае, августе сентябре и октябре 2008 года. Пчелиные семьи опытных групп обрабатывали 20% ным сахарным сиропом, содержащим 3,75 % щавелевой кислоты, методом поливания пчел в межрамочные пространства в объеме 5 мл на улочку. Во всех опытах до обработки и через 24 часа после нее из семей всех групп отбирали пробы пчел и расплода и исследовали их на наличие клещей. В мае исследования проводили на безрасплодных отводках, которые были поделены на опытную (4 отводка) и контрольную (3 отводка) группы. Опытные семьи обрабатывали однократно рабочим раствором вышеописанным методом. Контрольные семьи обрабатывали аналогичным образом 20% ным сахарным сиропом без препарата. Как показал анализ полученных данных, эффективность лечения безрасплодных отводков щавелевой кислотой в весенний период составила 100 %. Второй опыт проводили в августе сентябре на пчелиных семьях с расплодом. С этой целью подобрали 2 группы (опытную и контрольную) по 3 пчелиные семьи в каждой. Лечение опытных семей проводили двукратно с интервалом 14 дней вышеописанным методом. Во время второй обработки расплод в семьях отсутствовал. Контрольные семьи подвергали обработке 18

19 20% ным сахарным сиропом в аналогичном порядке. Во втором опыте в результате обработки численность эктопаразитов в семьях пчел снизилась с учетом контроля на 89,3±6,9 %. Гибели открытого и печатного расплода в период лечения и после него не отмечали. В третьем опыте в октябре 3 безрасилодные пчелиные семьи обработали однократно кислотой по описанной выше методике. Контрольную группу пчелиных семей пролечили «Биваром» в соответствии с наставлением по применению препарата. Как показали результаты опыта, эффективность обработки пчелиных семей щавелевой кислотой составила 94,7±5,3 % и не уступала эффективности бивара (92,4±7,6 %). Таким образом, исходя из результатов проведенных исследований, можно сделать вывод, что щавелевая кислота в концентрации 3,75 %, применяемая в 20% ном сиропе методом поливания пчел в межрамочные пространства в объеме 5 мл на улочку, обладает высокой акарицидной эффективностью при варроатозе пчел. Экономическая эффективность применении акарнцидных ковриков и щавелевой кислоты Экономическую эффективность применения акарицидных ковриков рассчитывали в сравнении с обработкой пчелиных семей ранее рекомендованным препаратом длительного действия фумисаном. Учитывая, что указанные препараты не оказывают отрицательного влияния на развитие пчелиных семей, а, следовательно, и на их продуктивность, в расчет последний показатель не брали. Обработка препаратом в виде пластин, помещаемых между рамками гнезда, а также размещение акарицидных ковриков проводится в ходе очередного осмотра пчелиной семьи и требует очень малых затрат времени (около 1 мин.), которые для данных препаратов практически равны. Таким образом, экономический эффект от применения акарицидных ковриков обусловлен лишь разницей в стоимости препаратов. Стоимость фумисана для обработки одной пчелиной семьи составляет 30 рублей, акарицидного коврика 8 рублей. Следовательно, экономический эффект от применения акарицидных ковриков составляет в сравнении с фумисаном 22 рубля на одну пчелиную семью. Экономический эффект от применения щавелевой кислоты методом поливания пчел в межрамочном пространстве, в сравнении с обработкой биваром, имеющим тот же способ применения, обусловлен разницей в стоимости препаратов, а также тем, что обработку кислотой проводят однократно, а биваром двукратно. Стоимость бивара для однократной обработки пчелиной семьи составляет 2,5 рубля, раствора щавелевой кислоты 2,0 руб. (в том числе 1,6 руб. кислота и 0,4 руб. сахар). Затраты труда на однократную обработку биваром и щавелевой кислотой равны и составляют 5,0 минут, а их стоимость при заработной плате пчеловода руб. в месяц (при 22 рабочих днях в месяце и 8 часовом рабочем дне) 4,75 руб. Таким обра 19

20 зом, общие затраты на однократную обработку щавелевой кислотой составляют 6,75 руб. (4,752,0), а на двукратную обработку биваром 14,5 руб. (4,752,5)х2. Следовательно, экономический эффект от применения щавелевой кислоты в сравнении с биваром составляет 7,75 руб. на одну пчелиную семью. Такой же эффект будет получен и в сравнении с обработкой пчелиных семей бипином, имеющим одинаковую с биваром стоимость и способ применения. ВЫВОДЫ 1. Анализ данных ветеринарной отчетности Тюменской областной ветеринарной лаборатории показал низкий уровень охвата пчелиных семей в области диагностическими исследованиями, который составляет 0,35 0,57 %. Клещ V. destructor выявлен во всех районах Юга области. 2. Из ранее рекомендованных препаратов длительного действия наиболее целесообразно применение фумисана, эффективность которого в условиях Тюменской области составляет 100 %. Использование апистана в связи с большим содержанием в нем флувалината и увеличенной длительностью обработки, а также высокой ценой, нецелесообразно. 3. В безрасплодный период из ранее рекомендованных химиотерапевтических методов наиболее целесообразны обработки пчелиных семей термическими препаратами на основе флувалината (танис), амитраза (ТЭДА), бромпропилата (акарасан), эффективность которых составляет соответственно 100,100 и 96,7±1,9 %. Бипин по акарицидной эффективности (91,3±0,7 %) достоверно уступает препарату ТЭДА, имеющему в составе то же действующее вещество. 4. Акарицидные холстики показали высокий терапевтический эффект при варроатозе (100%) лишь при значительном содержании флувалината 1500 мг и длительности обработки 40 суток, при этом выявлены остатки действующего вещества в меде после обработки. В связи с этим применение акарицидных холстиков мы считаем нерациональным. 5. Установлена высокая терапевтическая эффективность обработки пчелиных семей акарицидными ковриками, содержащими в качестве действующего вещества 100 мг флувалината. Эффективность их в производственном опыте при обработке пчелиных семей с расплодом в течение 35 дней составила 98,7±1,2 %. 6. Не установлено влияния обработок пчелиных семей акарицидными ковриками на количество выращиваемого расплода и их силу. Остатков флувалината в меде после обработок пчелиных семей акарицидными ковриками, содержащими 200 и 400 мг флувалината, не выявлено. Таким образом, применение акарицидных ковриков, содержащих флувалинат, является эффективным и безопасным методом борьбы с варроатозом. 20

21 7. Применение щавелевой кислоты в позднеосенний период в виде 3,75% ного раствора в 20% ном сахарном сиропе методом поливания пчел в межрамочных пространствах из расчета 5 мл на улочку высокоэффективный (94,7±5,3 %) экологически безопасный метод борьбы с варроатозом. По акарицидной эффективности он не уступает рекомендованным в этот период препаратам бипину и бивару. Обработка щавелевой кислотой данным методом не оказывала отрицательного влияния на пчелиные семьи. Эффективность обработок щавелевой кислотой безрасплодных отводков в мае составляла 100%. 8. Применение акарицидных ковриков и щавелевой кислоты дня обработок пчелиных семей при варроатозе экономически оправдано. Эффект от применения акарицидных ковриков в сравнении с обработкой пчелиных семей фумисаном составляет 22,0 рубля, а обработок щавелевой кислотой в сравнении с препаратами бипин и бивар 7,75 руб. на одну пчелиную семью. Использование акарицидных ковриков и щавелевой кислоты позволит повысить санитарные качества получаемых продуктов. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 1. Инструкция по применению акарицидных ковриков для терапии пчелиных семей при варроатозе (проект) (соавтор Т.Ф. Домацкая). 2. ТУ «Акарицидный коврик» (проект) (соавтор Т.Ф. Домацкая). СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Шнайдер А.А. Болезни пчел на пасеках Тюменской области / Н.Н. Васькова, Т.Ф. Домацкая, З.Я. Зинатуллина, О.А. Модин, Н.М. Столбов, А.А. Шнайдер // 14 е Ершовские чтения, посвященные 60 летию образования Тюменской области и 50 летию Ишимского государственного педагогического института им. П.Е. Ершова. Иішш: ИГПИ, С Шнайдер А.А. Патент на изобретение «Способ борьбы с варроатозом пчел» / Т.Ф. Домацкая, А.Н. Домацкий, А.А. Шнайдер // Бюллетень ФГУ ФИПС Шнайдер А.А. Заразные болезни пчел на пасеках Зауралья, разработка методов диагностики, профилактики и терапии пчелиных семей при основных инвазиях инфекциях / Т.Ф. Домацкая, Н.Н. Васькова, З.Я. Зинатуллина, О.А. Модин, Н.М. Столбов, СИ. Харитончик, А.А. Шнайдер // Материалы международной конференции «Пчеловодство XXI век. Темная пчела (Apis mellifera m.) в России» (Москва, мая 2008 г.). М.: Пищепромюдат,2008. С

22 5. Шнайдер А.А. Акарицидный коврик эффективное средство для терапии пчелиных семей при варроатозе / Т.Ф. Домацкая, А.А. Шнайдер // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки (в печати). 6. Шнайдер А.А. Эффективность применения щавелевой кислоты при варроатозе / А.А. Шнайдер // Труды ВНИИ ветеринарной энтомологии и арахнологии. Сб. научн. тр. 50 (в печати). Соискатель А. А. Шнайдер 22

23 На правах рукописи ШНАЙДЕР Александр Александрович РАЗРАБОТКА НОВЫХ МЕТОДОВ ПРИМЕНЕНИЯ АКАРИЦИДОВ ПРИ ВАРРОАТОЗЕ ПЧЕЛ И ИХ ЭФФЕКТИВНОСТЬ НА ПАСЕКАХ ТЮМЕНСКОЙ ОБЛАСТИ Специальность паразитология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Тюмень 2009 Подписано в печать г. Тираж 100 экз. Печать трафаретная. Формат 60x84/16. Заказ 12 Отпечатано в печатном цехе «Ризограф» Тюменского Аграрного Академического Союза , г. Тюмень, ул. Республики, 7.